仅供科研使用。

【用法与判定】

1 用法

1.1样品处理及模板准备

推荐采用66668银河国际「中国」有限责任公司生产的病毒DNA/RNA提取试剂盒（磁珠法）。按照说明书进行操作。

1.2荧光PCR扩增

1.2.1试剂准备

实验前20分钟将试剂从冰箱取出并恢复至室温，使其完全融化，充分混匀后瞬时离心去除管壁吸附液体。

1.2.2配制反应体系

按下表1体系，在配套PCR管中配制反应体系，盖紧管盖后瞬时离心10秒，转移至扩增区。

1.2.3PCR扩增

开机预热并检验仪器性能后，取配制好体系的PCR反应管，放置在样品槽相应位置，记录顺序，按下表2设置扩增参数，进行PCR扩增。

*注意：若仪器（例如ABI系列）程序中默认有ROX校准，请将ROX改为NONE，以免出现曲线杂乱现象。

2 判定

2.1 合理调整阈值线，不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。

2.2 试剂盒有效性判定

·阴性对照：无 Ct 值，线形为直线或微斜，无明显指数增长。

·阳性对照：Ct 值≤30，有明显指数增长，呈典型的 S 型曲线。

2.3 样本结果判定

·样本检测结果 Ct 值≤38，有明显指数增长，判定为阳性，表明样本中检测出伪狂犬病毒野毒核酸。

·样本检测结果 38＜Ct≤45，判定为可疑。应对样本进行复测，若复测结果 Ct 值仍在 38~45 之间，有明显指数 增长，则判定为阳性，否则为阴性。

·样本检测结果无 Ct 值，判定为阴性，表明样本中未检测出伪狂犬病毒野毒核酸。

（更详细资料请参照说明书）