仅供科研检测使用。
【用法与判定】
1用法
1.1样品处理及模板准备
推荐采用66668银河国际「中国」有限责任公司生产的病毒DNA/RNA提取试剂盒(磁珠法)。按照说明书进行操作。
1.2荧光PCR扩增
1.2.1试剂准备
实验前20分钟将试剂从冰箱取出并恢复至室温,使其完全融化,充分混匀后瞬时离心去除管壁吸附液体。
1.2.2 配制反应体系
设被检样品、阴性对照和阳性对照总和为 N,则反应体系配制如下:
将以上配制的反应体系充分混匀后,分装在配套的PCR管中各20μL,转移至扩增区,分别取5μL样本核酸和阴阳性对照加入相应的PCR反应管中,盖紧管盖作好标记后瞬时离心10秒。
1.2.3PCR扩增
开机预热并检验仪器性能后,取配制好体系的PCR反应管,放置在样品槽相应位置,记录顺序,按下表2设置扩增参数,进行PCR扩增。
表2仪器PCR扩增参数
*注意:若仪器(例如ABI系列)程序中默认有ROX校准,请将ROX改为NONE,以免出现曲线杂乱现象。
2 判定
2.1合理调整阈值线,不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。
2.2试剂盒有效性判定
·阴性对照:无 Ct 值,线形为直线或微斜,无明显指数增长。
·阳性对照:FAM、HEX、ROX 通道 Ct 值≤30,有明显指数增长,呈典型的 S 型曲线。
2.3 样本结果判定
(更详细信息请参照说明书)